Las bacterias del género Trueperella (anteriormente Arcanobacterium) son cocos aeróbicos, grampositivos, de tipo difteroide e incorporan 5 especies capaces de causar patologías variables entre humanos y animales: Trueperella pyogenes, Trueperella abortisuis, Trueperella bernardiae, Trueperella bialowiezensis y Trueperella bonsai. De estos, T abortisuis ha sido implicado como agente causante y abortivo emergente de placentitis supurativa en cerdos en Japón, Escocia y España, y ha sido aislado del semen de verracos clínicamente sanos en los EE.UU. Esta bacteria se aisló por 1ª vez en 2006 en un macho de 6 meses procedente de Japón con esplenitis hemorrágica necrosante e insuficiencia multiorgánica. En el momento del descubrimiento, la bacteria se clasificó como una especie de Arcanobacterium cepa HJ57-14E, con una similitud del 99,7% mediante la secuenciación del gen 16S rDNA7.
En 2009, la bacteria se aisló de la placenta de una cerda después de un aborto y se propuso la clasificación Arcanobacterium abortisuis antes de la reclasificación del género a Trueperella en 2011. Trueperella abortisuis ha sido aislada de tejidos fetales abortados y membranas fetales en Europa y Asia, y aislada de semen de verraco en España y EE.UU. Además, T abortisuis también se ha aislado en casos de metritis y vaginitis en vacas y en animales de compañía, incluido un felino con nefrolitos y urolitos, en un absceso del saco anal en un perro y en un absceso perianal en un gato. Sin embargo, la importancia de T abortisuis y su ruta de infección no está clara, especialmente en animales de compañía y en patología no reproductiva.
El informe actual resume una serie de casos de abortos en nulíparas y cerdas enviadas desde 3 sistemas de producción independientes al Laboratorio de Diagnóstico Veterinario del Estado de Kansas (KSVDL) entre septiembre de 2017 y mayo de 2020, en los que T abortisuis y otras bacterias se aislaron de muestras de placenta, contenido estomacal fetal o del líquido uterino de las cerdas afectadas, mediante cultivo bacteriano aeróbico y análisis de espectrometría de masas e ionización láser asistida por matriz (MALDI-TOF MS). Las lesiones macroscópicas y microscópicas en esta serie de casos se identificaron con frecuencia en la placenta y consistieron en una placentitis supurativa necrosante con cantidades variables de cocobacilos grampositivos, frecuentemente dispuestos en pequeños grupos o pares, consistentes con bacterias como la causa del aborto. Los propósitos principales de esta serie de casos son informar sobre la identificación de T abortisuis en granjas porcinas en todo el medio oeste de los EE.UU. y discutir su papel como posible bacteria abortiva.
DESCRIPCIÓN DEL CASO
Caso 1
El 1º conjunto de casos se presentó al laboratorio de diagnóstico desde septiembre de 2017 hasta noviembre de 2017 desde una granja de aproximadamente 5.600 cerdas primerizas en Kansas. La explotación estaba experimentando fallos reproductivos en primerizas con una disminución promedio del 12% en la tasa de concepción a los 30 días de gestación, en comparación con los datos históricos de la granja y de las granjas de cohorte de tamaño, genética, ubicación geográfica y prácticas de manejo similares.
La granja tenía antecedentes de infección por Senecavirus A (SVA) en el rebaño. Según los informes, se producían abortos en primerizas y cerdas gestantes entre los 24 y los 70 días de gestación. Las primerizas y cerdas afectadas no estaban clínicamente enfermas, pero mostraban signos clínicos de fallo reproductivo, incluidos ciclos repetitivos, aborto y flujo vaginal supurativo sin expulsión de los fetos.
En ese periodo de tiempo se enviaron múltiples muestras frescas y fijadas con formalina de fetos abortados, asas uterinas ligadas y secciones de tejido uterino, hisopos nasales, heces, riñones, saliva acumulada y suero de numerosas cerdas. Los fetos abortados no estaban momificados ni excesivamente autolisados. Las pruebas se realizaron en muestras según lo solicitado por el veterinario remitente e incluyeron de forma variable necropsia, histopatología, cultivos bacterianos aeróbicos y anaeróbicos, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real, serología y secuenciación metagenómica de próxima generación.
En todas las presentaciones, se realizó un cultivo aeróbico en muestras de líquido estomacal fetal, líquido de lavado uterino, hisopos uterinos, hisopos intracavitarios o membranas placentarias, según estuviera disponible. El cultivo de bacterias aerobias se realizó en agar sangre (Tryptone Soy Agar con 5% de sangre de cordero); Agar MacConkey o Columbia CNA con 5% de sangre de cordero a 37°C (±2°C) con 5% de CO2. Las muestras se cultivaron de medio a un tercio de las placas de agar, se incubaron de 15 a 24 horas y luego se interpretaron siguiendo los procedimientos estándar de laboratorio. Los aislamientos se identificaron utilizando MALDI-TOF MS utilizando el software MALDI-TOF MS (Bruker Daltonik), con extractos de proteínas estándar. Una puntuación de MALDI-TOF >2,0 indicaba identificación de especies, una puntuación de 1,7 a 1,9 indicaba identificación de género y una puntuación <1,7 indicaba ausencia de identificación o identificación poco fiable. Trueperella abortisuis se aisló consecuentemente en lavados uterinos. Se identificaron otros aislamientos aerobios y anaerobios menos consistentes en lavados uterinos (Tabla 1). Las muestras de semen se cultivaron sistemáticamente y no produjeron crecimiento de patógenos bacterianos. Los tejidos fijados en formalina se procesaron de acuerdo con los protocolos estándar en el laboratorio de diagnóstico. Todos los tejidos se tiñeron con hematoxilina y eosina; las membranas placentarias, el tejido uterino o las vísceras fetales se tiñeron adicionalmente con la tinción de Gram de Twort. Microscópicamente, el útero de las cerdas afectadas presentaba endometritis fibrinosupurativa, de moderada a grave, con glándulas endometriales moderadamente ectásicas que contenían pocos neutrófilos (Figura 1). La luz uterina de algunas cerdas reveló pequeñas cantidades de cocobacilos principalmente grampositivos, con menos bacilos y cocos grampositivos, y el cultivo aeróbico de una muestra fresca de este útero aisló abundante T pyogenes (Tabla 1). Las placentas de estas cerdas tenían áreas multifocales de necrosis trofoblástica y placentitis fibrinosupurativa leve y colonias de tamaño variable de cocobacilos grampositivos frecuentemente agrupados o emparejados (aproximadamente 0,5-1,0µm), menos cocos grampositivos (aproximadamente 0,7µm) y pequeños (aproximadamente 0,5µm), (-1,5 µm de longitud) bacilos y bacilos gramnegativos de tamaño similar. Microscópicamente, el pulmón de un feto tenía neumonía supurativa moderada. No se identificaron bacterias con tinciones especiales.
Se analizaron muestras de suero pareadas de varias cerdas de este rebaño para determinar las concentraciones séricas de inmunoglobulina M (IgM) contra los serovares de Leptospira Canicola, Pomona, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Hardjo y Bratislava utilizando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas específico de IgM cuantitativo en sándwich disponible en el mercado (ELISA) según las recomendaciones del fabricante. Varias cerdas tenían títulos elevados para L. Icterohaemorrhagiae y L. Canicola. La prueba de aglutinación microscópica (MAT) de L. Icterohaemorrhagiae servovar tuvo 5 de 19 cerdas con títulos superiores a 1:800 (rango de 1:1600 a 1:12800). La L Canicola serovar MAT tuvo 5 de 19 cerdas con títulos superiores a 1:800 (rango de 1:1600 a 1:6400). 2 semanas después de estos resultados, 5 de 18 cerdas tenían títulos de L. Icterhaemorrhagiae por encima de 1:800 (rango de 1:1600 a 1:12800), con solo 1 muestra (No. 5195) superpuesta del conjunto de muestras original, que había mantenido un título de 1:1600 y, según los informes, había abortado.
Utilizando el protocolo de laboratorio, la PCR con extracción de ADN estándar fue negativa en muestras de tejidos agrupados y en muestras uterinas individuales de varias cerdas. La PCR en tiempo real de circovirus porcino (PCV) tipo 2 fue negativa en muestras combinadas de suero. El aislamiento del virus no fue exitoso.
Debido al historial de SVA en esta granja, se realizaron pruebas de PCR para este patógeno y dieron negativo en muestras uterinas y fetales. La hemaglutinación de parvovirus porcino (PPV) tuvo 2 de 19 cerdas con títulos superiores a 1:256 (rango de 1:1024 a 1:512) sugestivos de exposición. Se enviaron muestras fecales para PCR para detectar el virus de la diarrea epidémica porcina, Lawsonia intracellularis, y delta coronavirus y todas fueron negativas. La PCR de la matriz del virus de la influenza porcina fue negativa en muestras de fluidos orales agrupados y frotis nasales.
La PCR en tiempo real de Tetracore para el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRSv) y el antígeno de placa ácida tamponado de Brucella (BAPA) fueron negativos en muestras de suero agrupado. La prueba de anticuerpos contra la glicoproteína B de la pseudorrabia fue negativa.
ELISA fue positivo o sospechoso en 17 de 22 (77,3%) casos presentados. El ensayo de anticuerpos fluorescentes indirectos cuantitativos de PCV tipo 2 tuvo 11 de 19 cerdas con títulos superiores a 1:320 (con un rango de 1:640 a ≥ 1:5120). Los niveles de minerales traza (incluido el selenio) y las vitaminas A, D y E se midieron en el suero de las cerdas afectadas y estaban dentro de los límites normales para las madres. La secuenciación metagenómica en una sola muestra de útero no identificó T abortisuis ni patógenos virales dentro de la muestra. También se realizaron cultivos bacterianos en esta muestra y no produjeron T abortisuis u otras bacterias.
Caso 2
En diciembre de 2017, se enviaron al laboratorio de diagnóstico grupos de fetos y placentas abortados de 11 cerdas de una granja de 8.000 cerdas primerizas en Wyoming, EE.UU., con un historial informado de empeoramiento de las tasas de aborto año tras año y una tasa de pérdida fetal de aproximadamente el 6% entre las gestantes, primerizas y cerdas en el momento de la presentación. Los fetos enviados tenían entre 35 y 95 días de gestación y el grado de autolisis post mortem varió de leve a marcado entre los grupos.
Un grupo de fetos se envió sin tejidos placentarios. Los 10 grupos enviados con tejidos placentarios tenían al menos 1 muestra de membranas fetales o placenta con un corion o alantoides que era multifocal a difusamente engrosado, edematoso, descolorido de gris a marrón o hemorrágico. Microscópicamente, 6 de 10 grupos (60%) con tejido placentario presentado tenían lesiones consistentes con necrosis placentaria que afectaba hasta el 20% del tejido. De ellos, 3 de 6 (50%) tenían una placentitis fibrinosupurativa compuesta por cantidades moderadas a abundantes de cocobacilos grampositivos, diplococos y bacilos gramnegativos cortos mezclados con trofoblastos exfoliados.
Un feto también tenía cantidades de moderadas a abundantes de cocobacilos grampositivos mezclados con menos bacilos grampositivos pequeños y neutrófilos degenerados raros, o macrófagos espumosos, dentro de las vías respiratorias. Se tomaron muestras de hisopos fetales o contenido estomacal de todos los grupos para cultivo bacteriano, y 2 de los grupos con placentitis bacteriana supurativa macroscópica y microscópica y neumonía tenían una placentitis fibrinosupurativa compuesta por cantidades, de moderadas a abundantes, de cocobacilos grampositivos, diplococos y bacilos gramnegativos cortos mezclados con trofoblastos exfoliados.
Un feto también tenía matas de cantidades moderadas a abundantes de cocobacilos grampositivos mezclados con menos bacilos grampositivos pequeños y neutrófilos degenerados raros o macrófagos espumosos dentro de las vías respiratorias. Se tomaron muestras de hisopos fetales o contenido estomacal de todos los grupos para cultivo bacteriano, y dos de los grupos con placentitis bacteriana supurativa macroscópica y microscópica y neumonía tenían abundante bacilos grampositivos y raros neutrófilos degenerados o macrófagos espumosos dentro de las vías respiratorias. Se utilizaron hisopos fetales o contenido estomacal de los grupos para cultivo bacteriano, y dos de los grupos con placentitis bacteriana supurativa macroscópica y microscópica y neumonía tenían T abortisuis aislado.
En la Tabla 1 se enumeran otros aislamientos aeróbicos y anaeróbicos. Se enviaron muestras agrupadas de placenta y pulmón de múltiples grupos para PCR en tiempo real para PRRSV y PCV tipo 2 y tipo 3, todas negativas. Las muestras agrupadas de placenta enviadas para PPV PCR también fueron negativas. La secuenciación metagenómica se realizó en muestras agrupadas de placenta y recuperó aproximadamente el 46% de eucariotas (genoma del huésped), el 42% de bacterias, el 3% de virus (fagos bacterianos) y el 6% de otros. Se extrajo una secuencia parcial de ARNr de 16S de T abortisuis de 550pb de las lecturas de la muestra y fue 98,8% similar a la cepa 15TRD1120-003 de T abortisuis (MH040922).
Caso 3
En mayo de 2020, 1 placenta y 3 fetos de cerdo de una primeriza se sometieron a necropsia con pruebas adicionales en una granja de 650 cerdas primerizas de Nebraska. No se revelaron antecedentes de aborto de otras madres o enfermedades maternales en la granja.
Los fetos enviados tenían una edad gestacional de aproximadamente 40 a 45 días y se les asignó aleatoriamente la identificación A, B o C. Los fetos y la placenta se encontraban en buenas condiciones post mortem. El feto A fue completamente insignificante. El feto B estaba contenido dentro de un saco amniótico cubierto de un exudado purulento de color amarillo tostado, de multifocal a coalescente, y el alantoides tenía un área discreta, localmente extensa, de decoloración marrón verdosa. El feto C también estaba contenido dentro de un saco amniótico y la placenta correspondiente al cordón umbilical y alantoides estaba transmuralmente teñida de rojo negruzco.
Microscópicamente, la placenta enviada tenía una placentitis fibrinosupurativa y necrosante con un número bajo o moderado de cocobacilos grampositivos, menos cocos y bacilos gramnegativos de tamaño pequeño a mediano adheridos al revestimiento del trofoblasto o adheridos a trofoblastos necróticos desprendidos. Microscópicamente, el feto C tenía una significativa onfalitis fibrinosa supurativa con cocobacilos grampositivos y bacilos gramnegativos pequeños a medianos intralesionales similares.
Se envió una muestra de amnios afectado del feto B para cultivo bacteriano aeróbico y se aisló abundante onfalitis fibrinosa con cocobacilos grampositivos intralesionales similares y bacilos gramnegativos pequeños a medianos.
Se enviaron muestras agrupadas de corazón, hígado, pulmón, riñón y bazo para PCR para PRRSv, PCV tipo 2 y tipo 3 y PPV, que dieron negativo.
DISCUSIÓN
Hay una creciente bibliografía que apoya el papel potencial de T abortisuis como una bacteria abortiva emergente de los cerdos. Esta bacteria se ha aislado previamente de la placenta, el útero o el feto de cerdas clínicamente afectadas en Japón y algunos países europeos, y del semen de verracos clínicamente sanos en los EE.UU. Según el conocimiento de los autores, este es el 1º informe de aislamiento de T abortisuis de tejidos fetales, placenta y muestras uterinas en abortos porcinos en los EE.UU. En nuestra serie de casos, el aborto no se relacionó con ninguna de las etiologías abortivas porcinas comunes. Causas bacterianas comunes de aborto, incluidas Brucella suis y Leptospira, fueron descartados por pruebas complementarias negativas, así como por la falta de signos clínicos típicos en la madre, que incluyen fiebre, anorexia, ictericia, aborto de fetos casi a término o a término, momificación fetal, mortinatos o nacimiento de lechones débiles que mueren al poco tiempo después del nacimiento. Las causas virales de aborto porcino, incluidos PRRSv, PCV tipo 2 y tipo 3, y PPV y otras etiologías virales también se descartaron mediante el análisis molecular de los tejidos fetales y la placenta, incluido el análisis metagenómico en algunos casos. En nuestra serie de casos, las lesiones macroscópicas y microscópicas observadas consistentemente en la placenta, el útero y, en algunos casos, el pulmón fetal fueron indicativas de una etiología bacteriana y fueron consistentes con las descritas en informes anteriores en los que se aisló T abortisuis.
El papel de T abortisuis en casos de endometritis y abortos en cerdos no ha sido completamente establecido hasta la fecha. Sin embargo, algunos informes anteriores han implicado su patogenicidad potencial en el aborto y la falla reproductiva en otros países. Algunos autores informaron el aislamiento de T abortisuis junto con otras bacterias en muestras de cerdos no clínicos, lo que sugiere que T abortisuis podría ser un patógeno comensal (u oportunista) del tracto urogenital de cerdos machos y hembras. Al igual que en la presente serie de casos, informes previos mencionan el aislamiento de T abortisuis junto con una población bacteriana mixta de los tejidos afectados, pero ninguna de estas otras bacterias se aisló consistentemente en estos casos. La mayoría de las bacterias adicionales aisladas en esta serie de casos no han sido implicadas como agentes causantes del aborto en especies porcinas y, hasta donde sabemos, son comensales o contaminantes de la piel conocidos de la recolección de tejido no estéril, como se sugirió en informes anteriores. En el presente informe, T abortisuis se aisló sistemáticamente de la mayoría de los tejidos afectados en los que se observaron cocobacilos grampositivos en el examen microscópico. Esto podría sugerir un papel potencial de T abortisuis en el aborto y falla reproductiva porcina, ya sea como patógeno primario o como cofactor en asociación con otros patógenos. La investigación adicional debe centrarse en identificar los rasgos patogénicos de T abortisuis, su interacción con otras bacterias comensales del tracto reproductivo y la reproducibilidad de la enfermedad. Debe continuar la vigilancia y las pruebas de diagnóstico para aislar y confirmar la patogenicidad de T abortisuis.
A diferencia de otros animales de producción, los abortos y la pérdida fetal en los cerdos generalmente se deben a una infección viral, y los abortos causados por bacterias a menudo son esporádicos y tienen una importancia limitada para la salud del rebaño, con menos del 25% de abortos en cerdos debido a bacterias. No se determinó la vía de infección en los casos presentados en este informe. En general, la patogenia del aborto inducido por bacterias incluye metritis preexistente, infección ascendente a través del cuello uterino, infección de la placenta o del feto después de bacteriemia de la madre o enfermedad materna. En los casos presentados, la infección ascendente, la metritis subclínica o la infección fetoplacentaria debido a la bacteriemia subclínica son menos probables, ya que, según los informes, las madres no mostraban ningún signo de enfermedad sistémica antes del aborto.
Otras posibles fuentes de infección bacteriana incluyen semen, herramientas o técnicas de inseminación y fómites en el medio ambiente. Trueperella abortisuis se ha aislado de testículos de verracos normales, lo que sugiere que la bacteria podría ser comensal en el órgano y podría ser una fuente plausible de infección. En el caso 1, la investigación extensa incluyó cultivos aeróbicos sistemáticos de muestras de semen y muestreo de las instalaciones y no produjo crecimiento de bacterias. Varios cambios de gestión también se implementaron simultáneamente en esta granja, ya que el equipo de gestión no estaba seguro si T abortisuis fue el patógeno primario dada la relativa falta de literatura que indicara su papel como bacteria abortiva primaria en el momento del aislamiento.
Estos cambios incluyeron la transición de la inseminación artificial (IA) poscervical a la IA tradicional, énfasis en la IA higiénica, aumento de la ventilación del establo, disminución de la humedad del establo y sacrificio de cerdas/primerizas que regresan al celo con flujo vaginal purulento. Estos protocolos dieron como resultado la terminación de los casos de aborto. No se identificó una causa desencadenante de la inmunosupresión que pudiera haber predispuesto a las primerizas/cerdas a la infección bacteriana; protocolos de bioseguridad, saneamiento e inseminación no fueron divulgados en las fincas de los casos 2 y 3. Estado nutricional y niveles de vitaminas y minerales, incluyendo selenio y vitaminas A y D.
En esta serie de casos, también destacamos la importancia de enviar conjuntos completos de tejidos, incluidas muestras fetales, de placenta y uterinas (ya sea como tejido uterino o hisopos del útero), ya que las lesiones fetales macroscópicas y microscópicas pueden estar ausentes o ser inespecíficas en los abortos. Los resultados del cultivo de bacterias aerobias y anaerobias deben interpretarse con precaución en ausencia de lesiones inflamatorias microscópicas, ya que el crecimiento excesivo post mortem y la contaminación fecal o ambiental pueden dar lugar a aislamientos bacterianos que pueden ser irrelevantes para la causa del aborto. Determinar un diagnóstico definitivo de muerte fetal o aborto en animales de producción puede ser un desafío dadas las numerosas causas potenciales infecciosas y no infecciosas que pueden contribuir a la pérdida fetal o embrionaria. El aislamiento de las etiologías infecciosas del aborto depende de la recolección adecuada y oportuna de los fetos y la placenta abortados, y de la interpretación adecuada de los resultados del diagnóstico. La placenta a menudo está contaminada y la mejor muestra para el aislamiento bacteriano es el fluido estomacal del feto abortado o un hisopo de la cavidad pleural o peritoneal del feto, que no siempre está disponible en las muestras enviadas. Para complicar aún más llegar a un diagnóstico definitivo, no todos los fetos de una camada suelen estar infectados en el momento en que ocurre el aborto, y los fetos pueden morir o infectarse en diferentes puntos, lo que también se observó en estos casos15. Se esperan abortos esporádicos en grandes operaciones de producción, por lo que muchos casos de pérdida fetal nunca se presentan para una evaluación diagnóstica. Por estas razones, muchas causas de muerte fetal y aborto siguen siendo idiopáticas. Las presentaciones también pueden no incluir muestras de tejido fresco o muestras de tamaño inadecuado. En cerdos, cuando se identifique evidencia macroscópica o microscópica de placentitis supurativa o bronconeumonía fetal, se debe incluir una causa bacteriana para el aborto como un diferencial potencial. Si bien las causas bacterianas del aborto en los cerdos suelen ser esporádicas, pueden contribuir a las pérdidas económicas, especialmente cuando se aíslan múltiples bacterias abortivas. Trueperella abortisuis como causa única o contribuyente de aborto en cerdos aún no se ha establecido por completo, pero debe considerarse como una posible causa de aborto bacteriano. Todos o algunos de los puntos discutidos anteriormente podrían haber jugado un papel en la gran brecha de tiempo de aislamiento entre los diferentes casos.
En conclusión, este informe llama la atención sobre el aislamiento de T abortisuis dentro de una serie de casos de aborto porcino y subraya la importancia de un extenso estudio de diagnóstico en los casos de aborto porcino para ayudar a descartar las causas infecciosas más comunes del aborto.
Autores:
- Alexandra K. Ford, DVM.
- Rachel M. Palinski, PhD.
- Brian V. Lubbers, DVM, PHD, DACVCP.
- Lisa Tokach, DVM, DABVP.
- A. Giselle Cino-Ozuna, DVM, PhD, DACVP.
Fuente: Anaporc